NY∕T 3286-2018 荠菜对乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂靶标抗性检测技术规程(农业)
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ID： |
F5B04F6C86F04E4ABBD98EA099FBD4E9 |
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0.39 |
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7 |
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日期： |
2021-12-23 |
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ICS 65.100,B 17 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/ T 3286一2018,荠菜对乙酷乳酸合成酶抑制剂类除草剂靶,标抗性检测技术规程,Guideline for the detection of Capsella bursa-pastoris (L.) Medik. target-site,resistance to acetolactate synthase inhibiting herbicides,2018-07 - 27 发布2018 - 12-01 实施,中华人民共和国农业农村部发布,刚吕,本标准按照GB/ T 1. 1-2009 给出的规则起草,本标准由农业农村部提出并归口,本标准起草单位:中国农业科学院植物保护研究所,本标准主要起草人:崔海兰、李香菊、于惠林、魏守辉、黄兆峰、李丹,NY/T 3286-2018,I,1 范围,荠菜对乙酿乳酸合成酶抑制剂类除草剂靶,标抗性检测技术规程,NY/T 3286-2018,本标准规定了荠菜[Ca户sella bursα-pα 酷乳酸合成酶(acetolactate synthase, ALS) 抑制剂类除草,本规程适用于荠菜对乙,2 规范性引用文件,下列文件对于本,件。凡是不注日期的,NY/ T 1667,NY/ T 1859.,3 术语和定义,NY/ T 166,3. 1,3. 2,3. 3,靶标抗性,由于,非靶标抗性,杂草对除,整株生物测定,通过整株杂草生,地上部生物量受除草剂,3. 4,生长抑制中量,使杂草生物量降低50% 的,3. 5,抗性指数r臼istance index(RI),除草剂对杂草疑似抗药性种群与敏感种群的生长抑制中量的比值,3. 6,靶标基因突变tru军:et-site gene mutation,注意事项,由于靶标基因DNA 分子中碱基对的取代，导致mRNA 的某一密码子发生变化，从而引起编码的,氨基酸变成另一种氨基酸，最终导致靶标酶多肤链中的氨基酸序列发生改变,4 检测程序,4. 1 种子采集,1,NY / T 3286-2018,当荠菜种子成熟时，在疑似发生抗药性的田块采集种子。采样田块应具有代表性，面积不小于667,时，成熟种子量不少于2000 粒,及时晾干采集的种子，装人种子保存罐，置于阴凉干燥处保存,4. 2 材料培养,选择元荠菜种子、无除草剂残留的农田地表土，混合20 %~30% 的草炭土，混合均匀后装人直径不,小于10 cm 的培养钵;待测种群及敏感对照种子用O . 05%~0 . 1 % 的赤霉素溶液浸泡12 h~24 h 后冲洗,干净，分别均匀撒播在土壤表面，覆土O. 2 cm~O. 5 cm ，采用盆钵底部渗灌方式补充水分，置于150C~,25 0C ，光照时间8 h~ 10 h 条件下培养。待荠菜长至2 叶期，间苗，每盆保留长势一致的10 个植株,4. 3 生物测定,4. 3. 1 单剂量ti别法,待植株长至3 叶期，用待测除草剂(ALS 抑制剂类除草剂)进行茎叶喷雾处理，除草剂剂量采用敏,感种群的最低致死剂量，每个处理不少于4 次重复，每个重复30 株。用药21 d 后，调查存活株数，按式,(1)计算株防效( %),式中:,E = 旦~ X 100 ……………… .. . . .………………… . (1),NT,E 一一存活植株数占总处理植株数的百分比，单位为百分率( %) ;,NL 一一处理后存活植株数，单位为株;,NT一一一处理植株总数，单位为株,4. 3. 2 剂量反应曲线法,经单剂量盟别法检测而明确有抗性的植株，进行繁殖，获得的种子用剂量反应曲线法进一步检测抗,药性指数,待植株长至3 叶期，用待测除草剂(ALS 抑制剂类除草剂)进行茎叶喷雾处理，药剂处理至少设置5,个剂量，每个剂量不少于4 次重复，每个重复10 株。以杂草鲜重或干重为指标，建立剂量反应方程，按,式(2)计算生长抑制中量,D-C,y = C 十……… … ………………………… (2) 1 + (x/ GRSO)b,式中:,Y 一一在除草剂处理下杂草地上部分鲜重或干重与对照鲜重或干重的百分比，单位为百分率( %) ;,C 待测指标下限，单位为百分率( %) ;,D 一一待测指标上限，单位为百分率( %) ;,X 一一除草剂剂量，单位为克每公顷(g/ hm2 ) ;,GRso 一一生长抑制中量，单位为克每公顷(g/hm2 ) ;,b 斜率,按式(3) 计算抗药性指数R I ,RI G~~R",旦O旦R …………………………………………… (3),GRsos,式中:,R I 抗药性指数;,GRSOR 抗药性种群生长抑制中量，单位为克每公顷(g/ hm2 ) ;,GRsos 一一敏感'1生种群生长抑制中量，单位为克每公顷(g/ hm2 ) ,4. 4 靶标基因检测,4. 4. 1 DNA 提取,‘,NY/T 3286-2018,取杂草幼嫩叶片，约200 mg ，采用十六皖基三甲基澳化镀(CTAB) 法或商品化试剂盒提取总DNA ,每个抗药性种群随机检测10 个~20 个抗药性植株,用1 %琼脂糖凝胶电泳检测l 提取的DNA 质量是否合格，电泳出现一条清晰明亮的条带，表示DNA,较完整，无降解,DNA 样品的纯度及浓度检测:用分光光度计测定DNA 溶液在260 nm 处的吸光值(OD260 ) 0 OD260,值等于1 时，样品中DNA 浓度为50 周/ rnL 。按式(4) 计算DNA 浓度,CDNA = OD260 X A X 50 … … ………………… … ………… (ω,式中:,……
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